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聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作步骤

来源:作者:人气:发表时间:2011-5-6 17:44:07【

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作步骤

  1.按图安装玻璃板

  2.按表制备分离胶(10%),将分离胶混匀后立即灌注于玻板间隙中,上层小心覆盖一层乙醇,将胶板垂直放于室温下,待分离胶聚合完全后,倾去上铺乙醇,用滤纸吸干。

  3.制备浓缩胶(4%):将浓缩胶混合后直接灌注在已聚合的分离胶上,立即插入梳子,将凝胶垂直放于室温下聚合。

  4.样品处理:在浓缩胶聚合时,取样品与等体积样品缓冲液混合,100℃加热1-2min。

  5.待浓缩胶聚合完全后,小心移出梳子,然后将胶板固定于电泳装置上,上下槽各加入电泳缓冲液。

  6.加样:用微量进样器加样,每个样品加入20μl。

  7.电泳:在100-150V恒压下电泳,直至溴酚蓝达到胶底部,关闭电源。

  8.染色:从电泳装置上卸下玻板,小心橇开玻板取出凝胶,放入染色液中染色2h以上。

  9.脱色:移出凝胶放入脱色液中脱色至本底无色为止。


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